New anticoagulant protein from medicinal leech
February 2024, Biochemical and Biophysical Research Communications 696:149473February 2024, 696:149473
Ранее мы провели комплексное исследование транскриптома, генома и протеома клеток слюнных желез пиявки, что привело к открытию нескольких ранее неизвестных гипотетических белков, которые могут обладать антикоагулянтными свойствами.
Впоследствии мы получили серию рекомбинантных белков и исследовали их влияние на свертывание крови в экспериментах in vitro. Мы идентифицировали ранее неописанный белок, который проявил высокую способность подавлять свертывание крови.
Рекомбинантный белок с His-тагом был экспрессирован в Escherichia coli и очищен с помощью металл-хелатной хроматографии. Для определения его активности использовались общепринятые методы исследования свертывания крови: активированное частичное тромбопластиновое время, протромбиновое время и тест ингибирования свертывания тромбином. Были проведены коагуляционные и хромогенные анализы для ингибирования фактора Xa, чтобы оценить анти-Xa активность. В качестве контрольного антикоагулянтного белка во всех экспериментах мы использовали рекомбинантный гирудин.
Новый белок проявил значительно большее ингибирование свертывания, чем гирудин при тех же молярных концентрациях в тесте активированного частичного тромбопластинового времени. Однако гирудин продемонстрировал лучшие результаты в прямом тесте ингибирования тромбина, хотя исследуемый белок также проявил способность ингибировать тромбин. Хромогенный анализ ингибирования фактора Xa не выявил активности, тогда как коагуляционный тест на фактор Xa показал противоположный результат.
Таким образом, в медицинской пиявке был обнаружен новый мощный антикоагулянтный белок.
Этот белок гомологичен антистатину, с 28% идентичных аминокислотных остатков. Рекомбинантный белок был экспрессирован в E. coli. Этот белок способен напрямую ингибировать тромбин, а на основании косвенных данных были идентифицированы и другие протеазы каскада свертывания крови.